DetecÈ›ia autoanticorpilor reprezintă un pas esenÈ›ial în diagnosticul bolilor autoimune, atât al celor sistemice – lupus eritematos sistemic (LES), artrită reumatoidă (AR), sindromul Sjögren, scleroză sistemică È™i sindrom antifosfolipidic – cât È™i cele specifice organelor – hepatită autoimună, colangită primară biliară, boala celiacă. În cazul anumitor boli, determinarea anticorpilor este inclusă în criteriile de diagnosticare/ clasificare, iar în cazul altora aceÈ™tia au valoare predictivă, anticorpii putând apărea cu câÈ›iva ani înaintea manifestărilor clinice.
Numeroase tehnici au fost folosite de-a lungul timpului pentru detecÈ›ia È™i cuantificarea autoanticorpilor. Datorită dezvoltărilor tehnologice, testele de imunologie au continuat să evolueze, în special prin modificarea tehnicilor de marcare a moleculelor de interes. Testele radioimunologice (RIA) au fost primele teste dezvoltate È™i sunt considerate strămoÈ™ii testelor imunologice moderne. SubstanÈ›a folosită iniÈ›ial ca marker a fost Iod-131, dar din cauza riscurilor asupra sănătății, aceasta a fost ulterior înlocuită cu Iod-125. TotuÈ™i riscurile la adresa sănătății personalului de laborator, precum È™i problemele legate de gestionarea deÈ™eurilor radioactive, au dus la dezvoltarea altor tehnici, care să aibă la bază substanÈ›e non-radioactive.
Folosind principiile aplicate în testele de radioimunologie, cercetătorii au dezvoltat o nouă tehnică în care antigenul sau anticorpul este marcat cu o enzimă în locul iodului radioactiv. Suportul este reprezentat de o microplacă pe a cărei pereÈ›i sunt fixaÈ›i anticorpi sau antigene, de care se vor lega ulterior biomoleculele complementare marcate. Această tehnică a primit numele de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Metoda È™i-a găsit rapid aplicaÈ›ii în diverse domenii, devenind rapid populară atât în laboratoarele de diagnostic, cât È™i în cele de cercetare din întreaga lume.
Metoda ELISA poate fi utilizată pentru diagnosticarea infecÈ›iilor cu diferiÈ›i agenÈ›i patogeni (HIV, hepatite virale, Citomegalovirus, Herpes, Borrelia, Sifilis, Chlamydia), pentru dozarea nivelurilor de hormoni, autoanticorpi, markeri ai bolilor oncologice, anticorpi IgE generali si IgE specifici in alergologie, pentru monitorizarea concentraÈ›iei medicamentelor în timpul tratamentului, pentru dozarea proteinelor ​​serice (feritină, fibronectină etc.)
Comparativ cu alte tehnici de imunotestare pentru detecÈ›ia È™i cuantificarea anticorpilor în probele de ser sau plasma, Elisa s-a dovedit a fi favorabilă datorită disponibilității reactivilor, performanÈ›ei robuste È™i a accesibilității în multe laboratoare. Cu toate acestea, ELISA suferă de anumite dezavantaje. În general, protocoalele de Elisa sunt complexe, cu mulÈ›i paÈ™i de lucru ce se întind pe perioade extinse de timp. De asemenea, în cazul anumitor biomolecule, sensibilitatea È™i specificitatea au înregistrat valori scăzute. Materialul din care este fabricată plăcuÈ›a-suport poate influenÈ›a reacÈ›ia, ducând la rezultate fals pozitive sau fals negative. Pentru a fi eficientă din punct de vedere financiar, este necesară strângerea unui număr cât mai mare de probe, ceea ce duce la timpi crescuÈ›i de generare a rezultatelor pentru pacienÈ›i.
Similar cu tehnica radioimunologică È™i Elisa, chemiluminiscenÈ›a utilizează molecule ce produc luminiscență ca marker al reacÈ›iei analitice. Suportul ales pentru fixarea anticorpilor sau antigenilor sunt bilele paramagnetice. Acestea au o suprafață de reacÈ›ie mai mare în comparaÈ›ie cu plăcile Elisa uzuale, aspect ce îmbunătățeÈ™te sensibilitatea testelor. Analizoarele ce utilizează tehnica chemiluminiscenÈ›ei au devenit rapid populare È™i s-au răspândit în toate laboratoarele, fiind utilizate pentru măsurarea concentraÈ›iilor de hormoni, medicamente, vitamine, marker tumorali, markeri infecÈ›ioÈ™i, markeri cardiaci È™i, în final, autoanticorpi, din ser sau plasmă.
Printre avantajele cheie ale metodelor analitice chemiluminiscente se numără intervalul dinamic larg de măsurare, intensitatea ridicată a semnalului, achiziția rapidă a semnalului analitic, stabilitate ridicată a reactivilor, consumul redus de reactivi, accesul aleatoriu și timpul de incubare redus.
Intervalul larg de măsurare, ce caracterizează metodele CLIA, presupune o sensibilitate analitică mai mare ÅŸi capacitatea de a detecta cu precizie concentraÈ›iile crescute de anticorpi fără a fi necesară o diluÈ›ie suplimentară a probei. Bilele paramagnetice, folosite ca suport pentru fixarea anticorpilor sau antigenilor, asigură suprafață mai mare de contact, caracteristică ce îmbunătățeÈ™te considerabil sensibilitatea testului.
În trecut, rezultatele rapide ale analizelor pentru autoanticorpi nu au reprezentat un obiectiv principal pentru clinicieni, în multe cazuri înregistrându-se timpi mai mari de răspuns pentru repetarea testelor pozitive sau pentru a doua opinie. În practica curentă, totuÈ™i, au apărut afecÈ›iuni autoimune care pun viaÈ›a în pericol sau boli autoimune asociate cu pierderea rapidă È™i progresivă a funcÈ›ionalității organelor, necesitând un timp de răspuns cât mai scurt pentru a permite diagnosticul etiologic È™i diferenÈ›ial rapid. Astfel, începerea terapiilor imunosupresoare sau a altor terapii specifice se va putea face cât mai curând posibil. Acesta este cazul, de exemplu, pentru vasculitele vasculare mici asociate ANCA, sindromul Goodpasture sau sindromul antifosfolipidic cu manifestări trombotice È™i hemoragice concomitente. În aceste situaÈ›ii clinice disponibilitatea rapidă a testelor de autoanticorpi este o oportunitate excelentă pentru diagnosticarea È™i tratamentul precoce pentru salvarea vieÈ›ii pacientului. Furnizarea mai rapidă de rezultate poate contribui de asemenea la o perioadă mai scurtă de spitalizare.
Inova Diagnostics, în prezent Werfen, a fost printre primele companii de diagnostic care a utilizat chemiluminiscenÈ›a în domeniul autoimunității. SoluÈ›iile oferite contribuie la diagnosticarea si monitorizarea bolilor mixte ale È›esutului conjunctiv, bolilor hepatice autoimune, vasculitelor, artritei reumatoide, sindromului antifosfolipic È™i bolilor inflamatorii autoimune. Testele sunt lucrate utilizând analizorul Bio-Flash.
|
|
Bio-Flash este un analizor complet automat, care utilizează metoda chemiluminescenÈ›ei, cu încărcare continuă È™i management al probelor de urgență. Având modul de refrigerare integrat, reactivii sunt stocaÈ›i la bordul analizorului, astfel reducând timpii de pregătire necesari înaintea unei sesiuni de lucru. Primul rezultat este eliberat în 30 de minute, analizorul având posibilitatea de a genera până la 450 de rezultate în 8 ore. Dimensiunile reduse ale analizorului îl fac potrivit pentru orice laborator.
Referințe
Aydin, S. (2015). A short history, principles, and types of ELISA, and our laboratory experience with peptide/protein analyses using ELISA. Peptides.
Cinquanta L, F. D. (2017). Chemiluminescent immunoassay technology: what does it change? Autoimmun Highlights 8, 9. doi:https://doi.org/10.1007/s13317-017-0097-2
Hosseini, S. V.-V.-P.-C. (2018). Advantages, Disadvantages and Modifications of Conventional ELISA. In: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA). SpringerBriefs in Applied Sciences and Technology().
Hosseini, S. V.-V.-P.-C. (2018). Fundamentals and History of ELISA: The Evolution of the Immunoassays Until Invention of ELISA. In: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA). SpringerBriefs in Applied Sciences and Technology().
Michael Mahler, C. B. (2016). Detection of autoantibodies using chemiluminescence technologies. Immunopharmacology and Immunotoxicology, 14-20.
Tarassishin, L. (2021). The Evolution of the Enzyme Immunoassay/Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. Journal of Proteomics and Genomics Research - 2(3), 13-17.
